2018年福州市动物疫病控制中心实验室诊断试剂和仪器采购项目
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| 项目名称 | 省份 | ||
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业主类型 | |
| 总投资 | 建设年限 | ||
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| 审批机关 | 审批事项 | ||
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1、原公告项目名 称：2018年福州市动物疫病控制中心实验室诊断试剂和仪器采购项目
2、原公告项目编号：[350100]FJLQ[GK]2018007
3、首次公告日期：2018-05-30
4、更正（补充）事项及内容：
4.1原招标文件第五章招标内容及要求二、技术和服务要求中添加以下参数内容“(16)品目号1-27布病ELISA抗体试剂盒 规格：2*96/盒。
原理:布氏杆菌抗体竞争ELISA诊断试剂盒用于检测流产布氏杆菌和马尔他布氏杆菌的血清抗体，该方法是一个多物种诊断试验，它既可以检测家养动物也可以检测野生动物的布氏杆菌特异性抗体。区分自然感染和疫苗免疫牛。
对于牛样本，该试验可以区分布氏杆菌感染牛和布氏杆菌19菌株免疫接种牛，以及交叉反应革兰氏阴性菌感染牛。该试验的性能比得上布氏杆菌补体结合试验。该诊断试剂盒是根据固相竞争酶联免疫吸附试验设 计而成的。
在本检测过程中，样本与一种抗平滑脂多糖抗原（S-LPS）o-多糖抗原确定簇特异性鼠单克隆抗体一起暴露于包被在微量板孔内的流产布氏杆菌平滑脂多糖（S-LPS）。
孵育一段时间以后，洗涤微量板，接着加入辣根过氧化酶HRP标记的山羊抗鼠IgG抗体交联物，该交联物可以与结合于板上的S-LPS的单抗相结合。通过洗涤洗去未结合的物质，然后加入底物溶液。由于酶标结合物作用于底物而形成颜色反应。光密度值以450nm酶标仪读取。
如果检测血清不存在抗布氏杆菌抗体（阴性），单抗与S-LPS抗原的o-多糖抗原确定簇结合，有颜色反应形成。如果检测血清含有布氏杆菌特异性抗体（阳性），则与单抗竞争抗原确定簇位点并阻止单抗与S-LPS抗原的o-多糖抗原确定簇结合，这时无颜色反应。19菌株疫苗免疫牛的血清由于特异性和较低的亲和力不与单抗竞争，而出现阴性反应。然而，在一些情况下免疫后6个月前采的样本可能出现阳性反应。
试剂组成
.流产布氏杆菌S-LPS抗原（非感染性）包被的微量板（密封并干燥保存）
.冻干单克隆抗体
.HRP标记交联物（辣根过氧化酶交联山羊抗鼠IgG），即用。
.20倍浓缩吐温磷酸盐缓冲液PBS-Tween
.样本稀释缓冲液
.底物溶液–（含H2O2的四甲基联苯胺底物缓冲液），避光贮存！！！
.终止液–含硫酸，有腐蚀性！！！
A. 阳性对照血清 –含0.05%硫柳汞
B. 阴性对照血清 –含0.05%硫柳汞
C. 弱阳性对照血清 –含0.05%硫柳汞
样本制备
每个样本孔需要 5 μl 血清或血浆。可以检测新鲜，冷藏或冷冻的血清或血浆。
试剂制备
PBS-Tween 缓冲液: 以蒸馏水20倍稀释PBS-Tween 20倍浓缩缓冲液。每个微量板制备500ml，取25ml20倍浓缩PBS-Tween原液，加475ml蒸馏水，混合均匀。
注意：请检查瓶中是否有结晶出现。若出现结晶，请浴热并摇匀。
单克隆抗体溶液: 以6ml 样本稀释缓冲液溶解冻干单抗。将缓冲液小心加入小瓶中。使用前立即配制。轻轻混匀，不要使用漩涡混合器。
操作步骤
1.使用前所有试剂应回温至室温18 － 25°C。
2.可按照下列两种方法稀释样本和对照。
2．1 先在试管内将对照和样本稀释后再加入微量板孔内。
2．2 先将缓冲液加入微量板孔内，再加入样本和对照。
3．1 对照和样本的预稀释
在试管内10倍稀释3个对照和待检样本，在180μl样本稀释缓冲液内分别加入20μl 对照或样本。
注：于2个适当的空内（作为交联物对照控制，Cc）加入50μl样本稀释缓冲液。
于每个适当的空内分别加入50μl预稀释的对照和样本。每个对照要设重复。
为了试验控制，建议样本也设重复。
3．2 在微量板内直接稀释样本和对照
在微量板孔内加入45μl样本稀释缓冲液。
A． 加入5μl血清对照。分别于适当孔内加入阳性对照、弱阳性对照和阴性对照。
B． 在2个适当的孔内（作为交联物对照控制，Cc）加入5μl样本稀释缓冲液。
C． 在每个适当的孔内加入5μl待检样本。为了试验控制，建议样本设重复。
4. 在用于对照和样本的所有孔内加入50μl单抗溶液。
注：单抗溶液加入对照和样本的时间差不能超过10分钟。
5．将微量板密封后于振荡器上振荡5分钟以充分混合。或者轻轻磕击微量板边缘。
6．于室温（18－25℃）孵育30分钟。
7. 以PBS-Tween缓冲液将微量板/条洗涤4次。每次洗涤应将孔充满，空净，叩板以除去全部液体。
8. 每孔中加入100 μl交联物溶液，将微量板密封后于室温条件下（18－25℃）孵育30分钟。
9. 重复第7步骤。
10. 每孔中加入 100 μl 底物溶液，并于室温条件下（18－25℃）孵育10分钟。第一孔加入后开始计时。
11. 每孔中加入50 μl 终止液，混合均匀，终止反应。终止液加入的顺序应按第10步骤加入底物溶液的顺序。
12. 于450 nm酶标仪读取对照和样本的光密度值（OD），以空气作为空白。应在加入终止液后15分钟内读取OD值，以避免OD值得波动。
计算
1．计算每一对照和样本的平均OD值。
2．按照下列公式计算对照和样本的百分抑制值（PI）:
（平均OD样本/对照×100）
平均OD交联物对照控制Cc
PI=100－（平均OD样本/对照×100）/平均OD交联物对照控制Cc
PI=100-
例：
样品OD值读数：0.300
结合物对照平均值读数：1.030
PI=100－（0.300×100）/1.030=70.9
结果解释
试验有效性标准
为保证试验有效，对照的值必须在如下范围内：
OD Cc 0.75－2.0
PI 阳性对照 90－110
PI 弱阳性对照 35－65
PI 阴性对照 （-10）－15
对于无效试验，应检查试验过程并重复试验。
检测样本结果判定
检测样本按照如下标准判定：
PI值 结果判定
<30％ 阴性
≥30％ 阳性
请注意那些判定为阴性的样本。
贮藏要求:2℃～8℃。
有 效 期:到用户手上保质期大于等于8个月。”
4.2原开标时间2018-06-25 15:00更改为2018-06-29 15:00。
5、更正（补充）后购买采购文件时间、地点、方式: 采购文件随同本项目采购公告一并发布；投标人应先在福建省政府采购网(http://cz.fjzfcg.gov.cn)注册会员，再通过会员账号在福州市政府采购网上公开信息系统按项目进行报名及下载采购文件，否则投标将被拒绝。
6、更正（补充）后网上报名: 与原公告一致
7、更正（补充）后响应文件提交的截止时间：2018-06-29 15:00
8、更正（补充）后开标（询价方式：报价公开）时间（系统引用时间）及地点：2018-06-29 15:00。福州市鼓楼区工业路523号福大怡山文化创意园北区3号楼101一层开标大厅
9、采购人名 称:福州市农业局
地址：福建省福州市仓山区南江滨西大道193号56号楼7层
项目负责人：登录即可免费查看
联系电话：登录即可免费查看
10、代 理机构名 称：福建立勤招标代 理有限公司
地址：福州市鼓楼区工业路523号福大怡山文化创意园北区3号楼101二层
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福建立勤招标代 理有限公司
发布日期2018-06-13
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